×
Буферы для разведения и хранения полимераз при проведении рутинной ПЦР
95

Буферы для разведения и хранения полимераз при проведении рутинной ПЦР

В состав буферов для хранения полимераз и проведения рутинных процессов ПЦР стандартно входят MgCl2 (10 мМ) и добавки, повышающие время полужизни и активность Taq-полимеразы с целью повышения стабильности фермента во время полимеразной реакции. Требования к буферу сводятся к набору качеств, повышающих стабильность фермента. Буфер должен быть химически стабилен, инертен и не менять оптимальной температуры отжига праймеров и\или характеристик плавления матрицы. Так, при применении в для хранения 50 мМ раствора MgCl2 и 50-кратной смеси dNTP можно легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему «матрица-праймеры», а 6-кратный буфер для нанесения амплификатов на гель облегчает подготовку пробы для электрофореза и контроль над ходом электрофореза. В некоторых случаях буфер не содержит ионы магния и необходимо это учитывать при планировании эксперимента и заказывать раствор солей магния отдельно.

Буфер для хранения и разведения рекомбинантной Taq ДНК полимеразы:
20 mМ Tris-HCl (pH 8.0),
0.5 mМ EDTA,
100 mМ KCl,
50 % глицерин,
0.5 % Tween-20

Буфер для хранения HS-Taq ДНК-полимеразы:
50 мМ Трис-HCl,
pH 8.0 (при 25 °С),
50 мМ NaCl,
0.1 мМ ЭДТА,
1 мМ дитиотреитол,
50% (v/v) глицерин
1% (v/v) Тритон Х-100.

Комментарии к статье:
Комментарии к статье отсутствуют

Комментарии могут оставлять только авторизованные пользователи.
Авторизуйтесь на сайте и получите доступ к множеству скрытых возможностей!